使用 RNase free 的超純水,進行 in situ hybridization (1) 反應,並與 DEPC(Diethylpyrocarbonate)處理水進行比較,(所謂 DEPC處理,是傳統的 RNase free 水的製作方法。這是在純水中加入 0.1% (v/v) 的 DEPC,經數小時的攪拌使 RNase 失去活性,之後再進一步以高壓滅菌釜來分解殘留的 DEPC)分析結果後發現,無論以任何水質所得結果皆相同,也就是具有相同的效果。

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由於 DEPC 處理水的製作過程耗費時間,使得進行 in situ hybridization 非常麻煩。而且,報告指出 DEPC 具有致癌性,應避免使用。而 DEPC 屬於強化學修飾劑,高壓滅菌釜 (autoclave) 處理仍有殘留的可能,這會對其它的酵素活性產生抑制,以及 RNA 造成修飾作用。

在此,為了了解 RNA 樣品在 DEPC 水中的安定性,我們將市售的 Total RNA 分別溶解於超純水(經超濾膜與紫外線照射)與 DEPC 水中,於 37℃靜置 1小時與 24小時後比較其安定性。結果顯示,24小時後, DEPC 水中的 RNA 已完全被分解,而超純水中的 RNA 只受到些微的分解。這種同時具有超濾膜與紫外線燈照射的超純水系統所提供的 RNase free 水可以同時兼具實驗者的安全性、作業效率與實驗的準確性。

近來,在生物學與分子生物學領域中經常使用 LC/MS、HPLC 與DNA晶片等儀器進行分析檢測,因此需要使用不含有內毒素、RNase 且低有機物含量的超純水。而 DEPC 處理水雖然不含有 RNase,但含有許多 DEPC 分解後所產生的離子與有機物質,在使用上受到很大的限制。因此,使用具有超濾膜與紫外燈的超純水系統對生物實驗而言是大勢所趨。

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